由于十两茶选用的优质黑毛茶原料和古朴的加工方法使其产生特殊的饮用价值，茶中的儿茶素和氧化产物黄烷醇类氧化基合物是一类复杂的生理活性物质，对人体健康大有裨益，如增强人体血管壁的韧性，抑制动脉硬化，具有维生素P的类似功能，抑制人体内不饱和脂肪酸的过氧化作用能力是维生素的5～10倍，可以延缓衰老，有利于维生素C的吸收，从而防止致癌物质——亚硝酸铵等硝基化合物的在人体新陈代谢中的形成积累等。饮用十两茶可以感受到茶味十足，滋味甜润醇厚、提神、解腻、促进血液循环，帮助消化，对缓解腹胀、止泻有明显功效。并具有抑制肥胖的功能，因而千两茶受到了国内外的消费者的青睐。
采用药物高通量筛选技术，已经确证了花卷茶具有显著的降血脂、降血糖和抗肿瘤活性。预试验中，发现花卷茶原料中酯型儿茶素含量高及加工过程中微生物代谢活跃的特点，而十两茶中茶多酚含量比其它茶品种要高52.1%，由此可以断定十两茶可能具有较强的抗氧化活性。并比较了14种黑茶提取物调脂和内皮保护作用，试验结果提示十两茶提取物的调脂和内皮保护作用优于其它黑茶提取物。
关于安化黑茶的心血管保护作用及机制的研究更不多见。采用现代药理学研究方法和国际上最先进分析测试手段，从整体动物及细胞分子水平，深入研究我国最古老、最传统、也是文化底蕴最深厚的茶叶之一——花卷茶，科学揭示花卷茶具备奇特功效的作用机理和生化基础，实现以科技拓展传统茶叶的市场空间和提升价值空间，为这个以边销为主体的传统产品拓展成为国际市场普遍接受的新型健康茶饮，提供有力的技术支撑，对维护边疆地区的社会安定及和谐有着重要的作用。同时也有利于提高本省茶农的收入，促进湖南黑茶产业发展腾飞，具有显著的经济和社会效益。
据中南大学湘雅二医院心内科实验室和实验动物中心杜万红博士2008年学位论文《湖南黑茶对血管内皮及内皮祖细胞功能影响及机制研究》一文试验研究得出：
大量动物实验和临床研究显示，高脂血症动物和患者均伴有血管内皮功能不全；血中低密度脂蛋白的浓度提升及氧化增加是高脂血症诱导内皮损伤的关键原因。因此，降脂和保护内皮功能被认为是防止高脂血症发展为AS的关键手段。精氨酸的同类物非对称二甲基精氨酸(ADMA)是一种内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物，能竞争性抑制NOS活性，减少一氧化氮(N0)生成。在高脂血症动物模型和临床患者血管内皮功能障碍与血浆ADMA水平显著升高密切相关；在体外培养的内皮细胞，ADMA能损伤血管结构、诱导氧化应激、促进血管炎症和脂质摄取。
《十两茶提取物对高胆固醇血症大鼠血脂和内皮功能的影响》 方法：
雄性SD大鼠高脂饲养4周诱发高胆固醇血症，其中实验组在高脂饲料饲养2周后开始每日灌胃给予不同剂量的十两茶水提物(50、100和200 mg／kg)，持续2周。实验结束后，颈动脉取血测定血脂、NO、ADMA和丙二醛(MDA)含量；分离胸主动脉检测血管内皮依赖性舒张功能。
结果：
十两茶提取物能呈剂量依赖性地降低高脂血症大鼠血清总胆固醇和LDL及甘油三酯水平。十两茶提取物能显著改善高脂所诱导的血管内皮舒张功能障碍，降低血浆ADMA和MDA含量以及增加NO水平，且呈剂量依赖性。
结论：
十两茶提取物具有降低血脂和保护血管内皮功能作用，其作用与抑制脂质过氧化、调节ADMA／NO系统有关。
《十两茶提取物对高脂诱导家免动脉粥样硬化形成的影响》 方法：
家兔高脂饲料喂养4周后，分别灌胃给予不同剂量的十两茶提取物(25、50和100 mg／kg)，共4周。实验结束后，颈动脉取血检测红细胞变形能力，测定血脂、NO、ADMA和MDA含量；分离胸主动脉检测脂质斑块面积和血管内皮依赖性舒张功能。
结果：
十两茶提取物能呈剂量依赖性降低高脂饲养家兔血清总胆固醇和低密度脂蛋白水平，同时显著减少主动脉粥样斑块面积和改善血管内皮舒张功能及红细胞变形能力。十两茶提取物显著降低血清MDA和ADMA含量和增]JI：INO水平，且呈剂量依赖性。
结论：
十两茶提取物具有抗动脉粥样硬化作用，其机制与抑制脂质过氧化、调节ADMA／NO系统，改善血管内皮功能和红细胞变形能力有关。
《十两茶提取物对OX．LDL致内皮细胞衰老的影响》 方法：
1．培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)；分离提取人LDL，Cu2+诱导其氧化；
2．检测B一半乳糖苷酶活性(染色法)和端粒酶活性(TRAP一银染法)评价细胞衰老状态；
3．使用荧光染料H2DCF检测细胞内氧自由基生成；
4．高效液相色谱(HLPC)检测培养液ADMA水平及细胞内DDAH活性；
5．Real time PCR检测DDAH2 mRNA水平；
6．设计DDAH siRNA，脂质体介导转染入HUVECs沉默DDAH2基因表达。
结果：
1．OX—LDL(100／l￡g／m1)处理48 h后，B一半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增加，而端粒酶活性显著降低，与正常组比较具有统计学差异(P 2．OX—LDL(100／比g／m1)孵育HUVECs 48 h，可明显增强细胞内活性氧族(ROS)水平。然而，预处理不同浓度的十两茶提取物(1、2．5和5 mg／rrd)能显著抑制OX—LDL诱导的ROS水平增加。
3．OX．LDL(100#g／m1)孵育HUVECs 48 h，可显著增加培养液中ADMA水平和降低细胞内DDAH活性。然而，预处理不同浓度的十两茶提取物(1、2．5和5 mg／m1)能显著抑制OX-LDL诱导的ADMA水平增加和DDAH活性的降低。这样的处理均不影响DDAH2 mRNA的表达。
4．DDAH2 siRNA能明显抑制十两茶提取物(5 mg／m1)抗OX—LDL诱导的B一半乳糖苷酶阳性细胞数增加和端粒酶活性下降作用。
结论
十两茶提取物抑制OX．LDL诱导的内皮细胞衰老，其作用可能与抑制氧化应激，改善DDAH活性和降低ADMA水平有关。
十两茶提取物丰lpglJox—LDL致内皮祖细胞功能障碍的影响 方法
1．培养和鉴定人脐静脉血EPCs；
2．检测细胞迁移能力和Tube形成能力评价EPCs功能；
3．HLPC检测培养液ADMA水平；酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液VEGF水平；
结果：
1．OX—LDL(100#g／m1)处理48 h后，EPCs迁移和Tube形成能力均显著下降，与正常组比较具有统计学差异(P<0.01)。预先给予不同浓度的十两茶提取物(1、2．5和5 mg／m1)可显著抑制OX．LDL诱导的EPCs迁移和Tube形成能力降低。
2．OX-LDL(100∥g／m1)孵育EPCs 48 h，可明显增加培养液中ADMA水平和降低VEGF水平。预处理不同浓度的十两茶提取物(1、2．5和5 mg／m1)fl湿著抑制OX．LDL诱导的ADMA水平增加和VEGF水平的降低。
结论：
十两茶提取物抑制OX．LDL诱导的EPCs功能障碍，其作用可能与抑制氧化应激，降低ADMA水平和增加VEGF生成有关。
《十两茶提取物对高胆固醇血症大鼠血脂和内皮功能的影响》 2．材料与方法
2．1材料
2．1．1研究对象
60只雄性SD大鼠(180--2009)，由湖南农业大学长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供。
2．1．2试剂和仪器
十两茶 湖南安化白沙溪茶厂
胆固醇 由湖南农业大学长沙市开福区东创实验
猪胆盐 上海源聚生物科技有限公司
丙硫氧嘧啶 上海复星朝晖药业有限公司
NO和丙二醛(MDA)试剂盒 南京建成生物科技研究所
辛伐他汀 Sigma公司
BUXCO生物记录软件 澳大利亚Powerlab公司
722s分光光度仪 上海第三分析仪器厂
三诺SXT．1型快速血糖测试仪 长沙三诺生物传感技术公司
2．1．3十两茶水提取物的配制
将十两茶原料处理成碎状，按每克茶叶JJnl2 mlAjg水进行提取，沸水浴1h，精密过滤，冷却，经低温真空浓缩后冷冻干燥，得十两茶水提取物粉末。高效液相色谱(HPLC)124】检测其ee)L茶素含量22．43％；紫外分光光度法(Folin．Denis法)125】检测其茶多酚含量52．1％。
2．2方法
2．2．1实验动物与分组
雄性SD大鼠(180--200 g)按体重随机分为正常对照组(10只)和高胆固醇组(50只)。高脂饲料构成为基础饲料中加入10％猪油、2％胆固醇、0．5％猪胆盐及0．2％丙硫氧嘧啶。于实验第14天，尾尖取血，测定各组血脂水平。然后再将高胆固醇组按血脂水平随机分为5组：高胆固醇模型组，3个不同剂量十两茶组(每日分别灌胃给予十两茶提取物50，100和200 mg／kg)，阳性药物辛伐他汀组(每日灌胃给予辛伐他；?T10 mg／kg)。连续给药2周。正常组和高胆固醇模型组灌以等体积双蒸水。末次给药后禁食12 h，颈动脉取血测定血脂、NO、ADMA和丙二醛(MDA)含量：分离胸主动脉检测血管内皮依赖性舒张功能。
2．2．2血脂、MDA和NO测定
血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和LDL采用全自动生化分析仪测定；硫代巴比妥酸法测定血浆MDA含量，反映脂质过氧化水平：硝酸还原酶法测定血浆N02"水平，反映NO含量；
2．23 ADMA测定
取血浆0．5 mlJJll5．磺基水杨酸沉淀蛋白，混匀，离，C,,10分钟后取上清液，用高效液相色谱测定血浆中ADMA的含量(HPLC系统：LC一10Advp；色谱柱：Nova．Pak C18)。取10“l样品或标准品JJll)k100山衍生试剂(邻苯二甲醛与硼酸缓冲液及B．巯基乙醇的混合物)，混匀，室温下反应3 min后进样，然后用线性梯度洗脱的方式将样品从色谱柱中洗脱(流动相A为0．05乙酸钠(PH 6．8)：甲醇：四氢呋喃=82：17：1(vⅣⅣ)：流动相B为0．05M乙酸钠：甲醇：四氢呋喃=22：77：1(V／VⅣ)，流速为lml／min)，经预柱处理后，用RF．10Axl型荧光检测器对其及内标ADMAJ羞行检测(激发波长：L338nm；吸收波长：入．425nm)。
2．2．4离体血管内皮依赖性舒张功能检测
分离和剪取大鼠胸主动脉段，置于充以95％02和5％C02混合气体的改良克氏液(NaCI 118，KCI 4．7，Mgs04 1．2，NaHC03 25，KHP04 1．2，CaCl22．5，Glucose11 tool／L)中。小心剪去血管周围结缔组织，清除血管内血液，剪成约3—4 mm的血管环，一端固定于浴槽，另一端连接张力换能器，通过Power Lab生物记录系统连续记录血管张力变化。血管环置于充满95％02和5％C02混合气体的改良克氏液的水浴槽中(37℃)，每隔15 min更换克氏液一次。调节静息张力为29，平衡60 min，加用KCI(60 mmol／L)收缩血管，冲洗2～3次后，重新平衡血管环，用苯肾上腺素(10．6M)收缩血管，待稳定后观察累积浓度的乙酰胆碱(ACh，3x10"9—10击M)诱导血管内皮依赖性舒张。
2．3统计学处理
所有数据均以均数±标准误(i-I-SEM)表示。用SPSS进行统计学处理，组间差异采用方差分析。双侧P<0．05认为有显著性差异。
3结果
3．1十两茶提取物对血脂的影响
高脂饲料喂养大鼠4周后，血清TC、LDI_痢TG水平明显升高(P<0．05静3．2十两茶提取物对胸主动脉内皮舒张功能的影响
与正常对照组比较，高胆固醇血症组大鼠的胸主动脉对ACh诱导的血管内皮依赖性舒张效应显著降低(P<0．01)。三个剂量十两茶提取物(50，100和200 mg／kg)能显著改善高脂诱导的血管内皮舒张功能障碍，且呈浓度依赖性。阳性药辛伐他汀(10 mg／kg)也可显著改善高脂诱导的血管内皮舒张功能障碍(见
图1-1)。
3．3十两茶提取物对血浆NO浓度的影响
与正常对照组比较，高脂饲养大鼠的血浆NO水平显著降低(P<0．01)。三个剂量十两茶提取物(50，100和200 mg／kg)能浓度依赖性增加高脂诱导的血浆NO水平降低。阳性药辛伐他汀(10 mg／kg)也可显著增加高脂诱导的血浆NO水平降低(见表1．2)。
3．4十两茶提取物对血籼嗽平的影响与正常对照组比较，高脂饲养大鼠的血浆ADMA水平显著增加(P<0．01)。三个剂量十两茶提取物(50，100和200 mg／kg)能浓度依赖性降低高脂诱导的血浆ADMA水平增加。阳性药辛伐他汀(10 mg／kg)也可显著降低高脂诱导的血浆ADMA水平升高(见表1．2)。
3．5十两茶提取物对血浆MDA含量的影响
与正常对照组比较，高脂饲养大鼠的血浆MDA水平显著增加(P<0．01)。三个剂量十两茶提取物(50，100和200 mg／kg)能浓度依赖性降低高脂诱导的血浆MDA水平增加。阳性药辛伐他汀(10 mg／kg)也可显著降低高脂诱导的血浆MDA水平升高(见表1．2)。
5．结论
综上所述，十两茶提取物具有明显的降脂和保护血管内皮功能作用，其机制与抑制氧化应激，调节AD删O系统有关。 |